Näytteen valmistelu:
Näytteenkeruu: Kerää näytteitä, kuten veri, kudos, sylki ja virtsa kokeen tarkoituksen mukaisesti.
DNA: n uutto: Käytä erillistä DNA -uuttopakkausta DNA: n uuttoon näytteestä.
PCR -reaktion valmistus:
Suunnittelupohjat: Suunnittelupesifiset alukkeet, jotka perustuvat kohdesekvenssiin templaatti -DNA: n monistamiseksi.
Valmista reaktioseos: mukaan lukien templaatti -DNA, alukkeet, puskuri, DNA -polymeraasi, DNTPS (deoksynukleosidi trifosfaatit), mg 2+, jne.
Aseta PCR -ohjelma:
PCR -instrumentti -asetukset: Syötä esiasetettu PCR -syklin parametrit, kuten 95 asteen esilämmityslämpötila, denaturointilämpötila (kuten 95 astetta), hehkutuslämpötila (kuten 55 astetta), pidennyslämpötilaa (kuten 72 astetta) ja syklien lukumäärän.
PCR -reaktio:
Lisää näyte: Lisää reaktioseos PCR -reaktiosäiliöön tai siruun, ja jokaisella näytteellä on yleensä yksi reaktiokaivo.
Suorita PCR: PCR -instrumenttisyklit esiasetetun ohjelman mukaisesti, mukaan lukien lämmitys, jäähdytys, hehkutus ja laajennusvaiheet.
Tuoteanalyysi:
Jäähdytys monistumisen jälkeen: Kun PCR on valmis, näyte jäähdytetään hetkeksi 4 asteessa.
Elektroforeettinen erotus: Käytä geelielektroforeesitekniikkaa, kuten agaroosigeelielektroforeesi, eripituisten PCR -tuotteiden erottamiseksi.
Fluoresenssin skannaus: Fluoresoivasti merkityt alukkeet säteilevät tietyn aallonpituuden valoa monistetussa tuotteessa, ja PCR -instrumentti lukee nämä signaalit ja tallentaa ne.
Tietojenkäsittely ja tulkinta:
Tietoanalyysiohjelmisto: Käytä erikoistunutta ohjelmistoa fluoresoivan signaalin analysoimiseksi ja lasketa kohdefragmentin pitoisuus tai suhteellinen pitoisuus.
Tuloksen tulkinta: Perustuu PCR -käyrän ja lähtötilanteen perusteella, onko PCR onnistunut, onko kohdefragmentti olemassa ja kuinka paljon se on.
Tuloksen tallennus ja säilyttäminen:
Tallenna tulokset kokeelliseen raporttiin ja säilytä alkuperäiset tiedot ja näytteet oikein.